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Step 1
Step 2
Step 3
分别使用LeviCell™技术和最常见的磁珠法(常见商业化试剂盒)处理初始样本。两种方法均手动对活细胞及死细胞进行计数以计算得率和活力,结果如下。
LeviCell™成功地从各种初始样本中清除死细胞和碎片,同时保持样本中原始的细胞群表征。此外,LeviCell™能够将含有少量初始活细胞的样品中的活力富集至90%以上,且在各种细胞起始数量情况下均具有可扩展性。
两种解离肿瘤细胞 (DTC) 各取 100,000 个利用LeviCell™进行处理。在20分钟内,通过仅3个步骤即成功完成了两个样本的处理,清除了死细胞和碎片,富集后活力达到90%以上。
两种解离肿瘤细胞 (DTC) 各取 100,000 个利用LeviCell™进行处理。在20分钟内,通过仅3个步骤即成功完成了两个样本的处理,清除了死细胞和碎片,富集后活力达到90%以上。
卵巢样本分为各含 100,000 个细胞的两份,分别使用LeviCell™和常见的磁珠法死细胞去除试剂盒进行处理。接着使用台盼蓝染色和血细胞计数器进行细胞计数以分析两种富集方法的产物。
在提高得率和活力方面,LeviCell™的表现均明显优于磁珠法,在处理复杂样品时也能提供快速、简便、更简洁的工作流程。此外,如下节所示,即使是处理最为敏感的细胞类型,LeviCell™也能保留初始样本的原始细胞表征而不影响其基因表达谱或活化状态。
对处理后细胞群表征无负面影响
如图显示了LeviCell™温和的细胞分离方式,可以用来研究常用的脆弱、敏感型原代细胞,而不影响其细胞群完整性。
已分选和未分选卵巢DTC样本均使用 TruStain human Fc Block 在室温下进行封闭 15 分钟,然后分别加入抗-CD45、抗-CD19、抗-CD11b 各 5 μL 及抗-CD3 10 μL 进行染色,在室温下放置30分钟。接着使用FACS缓冲液(含有0.5% BSA的PBS)清洗样本一次,再使用Sony SH800S进行分析。LeviCell™处理后产物的分析显示,CD45+淋巴细胞群中含有的CD3+、CD19+ 和CD11b+细胞数与处理前相当;而磁珠法处理后分析显示其CD3+ 和CD11b+细胞所占比例降低。
使用巨噬细胞(最为敏感的细胞类型之一)来证明LeviCell™的处理方式足够温和。以上结果数据清晰表明,LeviCell™对处理后细胞的活化状态无负面影响。
使用IFN-γ 和IL-4处理巨噬细胞,使其极化进入M1或M2状态。接着将样本放入 LeviCell™系统进行处理,再进行qRT-PCR以检测这些细胞中M1特异性基因(iNOS)和M2特异性基因(Arg1)的表达。结果显示经LeviCell™处理后细胞活化状态没有改变。对上述活化状态,在分选前后样本间未观察到明显的基因表达差异。