LeviCell™
肺泡II型细胞简介
当前COVID-19大流行时期，理解SARS-CoV-2（严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2）病毒（可引起COVID-19）的病理学需求，对疫苗和挽救生命疗法的研发是急迫且至关重要的。II型肺泡（ATII）细胞是SARS-CoV-2的主要靶标之一，在肺泡塌陷、导致肺不张、先天免疫应答机制中扮演着重要角色，但它却是难以分离和研究的细胞类型之一。这部分归因于ATII细胞在培养中倾向于分化为ATI细胞，以及它们对于初次分离的成纤维细胞污染的敏感。已公开发表的成功分离ATII细胞案例均需要高度专业的科学家与设备，这增加了细胞分析改进的复杂性、成本及时间，从而延迟了药物开发的速度。这是LeviCell™可以做出贡献的地方。
方法
为了满足高存活力的敏感及困难细胞类型（例如ATII细胞）的分离的需求，LevitasBio, Inc.开发了LeviCell™平台 - 一种功能强大，无标记的细胞分选平台，可轻柔、快速、高效地分离和富集细胞。凭借其创新的液相磁悬浮芯片技术，利用细胞的固有密度和磁特征差异，LeviCell™从三个方面改进了当前的细胞分离方法。
Advantage 1
LeviCell™不使用标记即可处理细胞，使用标记会激活敏感的细胞类型，例如巨噬细胞、脂肪细胞、心肌细胞和ATII细胞。
Advantage 2
LeviCell™的处理过程快速、简便且可靠，它提供了一种可重现的细胞分离方法，而不需要昂贵且复杂的工作流程。
Advantage 3
LeviCell™可以处理任何起始细胞数量的典型与难分离的细胞类型，具有其他现行技术不具备的广泛的适用性。
这些特性使得LeviCell™可成为一种理想的技术，可快速有效地解决高效且一致性地分离原代ATII细胞的技术挑战，同时从人类样品获得高活力细胞，用以COVID-19治疗研究和开发的紧急用途。
上样 - 悬浮 - 收集
Step 1
上样
将样品吸移到LeviCell™芯片中
Step 2
自动无标记排序
精确的密度梯度可根据细胞的物理性质来驱动悬浮
Step 3
样品采集
选定的种群被收集到单独的收集孔中，以供进一步分析或使用
结果
健康的人体肺部样品被HTII-280 （一种对ATII细胞顶端表面膜蛋白特异的单克隆抗体）标记，以在LeviCell™平台中悬浮时帮助识别它们。下图展示了使用明场和荧光显微镜将HTII-280标记的ATII细胞引入LeviCell™中。大多数的ATII细胞悬浮在参考线上方，表明具有强大的生存能力。参考线下方的细胞则可能已经死亡、濒临死亡或代表不同的ATII细胞亚型。
LeviCell™平台中的ATII细胞分离的明场（左）和荧光（右）显微镜影像。ATII细胞用HTII-280标记，以在分离通道中被可视化。参考线指示下游样品分离器所处的液位。细胞被分离器分离并流向不同的出口：活细胞（顶部）和细胞碎片/死细胞（底部）。
平衡后，顶部和底部条带（分别位于参考线上方和下方）通过两个不同的出口被洗脱分开，并在下图中成像。细胞用DAPI、抗KRT5抗体和先前应用的抗HTII-280抗体染色，以便于识别和评估富集效果。DAPI结合DNA的AT富集区域，指示细胞核的位置，而KRT5是肺基底细胞的标志物。
经LeviCell™分离后的细胞影像。顶部条带（顶图）显示富集了用HTII-280染成红色的ATII细胞的样品，底部条带（底图）显示了样品中存在的残留细胞。分离细胞的影像显示，与从底部条带收集的样本相比，通过消除了大量的I型肺泡细胞和其他细胞，顶部条带中的ATII细胞富集效果显著。这些数据有力地支持了LeviCell™平台提供优化方案的能力，以分离和富集高度活性且适合培养的ATII细胞。
结论
LeviCell™平台已经证明了许多细胞系的分离能力，包括高度敏感的细胞类型（例如ATII细胞），这些细胞类型无法轻易使用常规方法分离。当前的主流技术依赖于标记，这经常引起诸如降低敏感细胞类型的活力；不适合培养的分离物纯度；大量初始细胞群需求；高细胞死亡率；意外改造；以及分离过程中产生潜在的气溶胶等问题。尤其对于SARS-CoV-2来说，因为病毒颗粒的气溶胶化造成科学家更容易感染病毒。LeviCell™提供了一种经济高效、简单、省时、易复制且无气溶胶的方法，可从人体组织中分离感染和未感染的ATII细胞的，且不会牺牲活性、富集或试验的完整性。LeviCell™在实验室的应用，将加速COVID-19疗法的开发，并支持更广泛的SARS-CoV-2研究工作。
