巨噬细胞

简介

进行巨噬细胞体外研究的科学家和研究人员们都很清楚，要想取得创新且有影响力的科研成果，就必须投入大量的时间、承受无数挫折并克服在重现研究成果时面临的挑战。主要原因在以下这几个方面：1. 巨噬细胞在各种人体组织中的数量都很少，难以满足各类下游分析的需求；2. 巨噬细胞无法在体外增殖，它们需要用特定的培养基分选和分化，而这个过程极其耗费时间；3. 除了上述困难，巨噬细胞对于传统分选手段和技术的处理过程还十分敏感。
实验证明，LeviCell™能够成功地分选活的巨噬细胞，产量大、活力高，同时还不会改变细胞的活化状态。20 分钟内无需标记细胞，就能可靠地提供活的巨噬细胞用于下游的准确研究分析。由于整个分选过程在 LeviCell™受控的全密闭环境中进行，仅需要 3 个简单步骤即可完成（而现有方法却十分复杂，涉及 13 - 16 个步骤），这在最大程度上保证了结果的重现性。

方法

LeviCell™是一款革新性的磁悬浮技术分选富集平台，使用低于 1 psi 的压力，即可通过简单的三步在 20 分钟内实现无接触、无标记的巨噬细胞分选过程。

Step 1

上样

将样品吸移到LeviCell™芯片中

Step 2

自动无标记排序

精确的密度梯度可根据细胞的物理性质来驱动悬浮

Step 3

样品采集

选定的种群被收集到单独的收集孔中，以供进一步分析或使用

结果

LeviCell™可富集活的巨噬细胞

使用小鼠巨噬细胞系评估LeviCell™对巨噬细胞等脆弱或敏感型细胞的处理是否足够温和。取巨噬细胞（含有10% FBS的DMEM缓冲液中培养），使用台盼蓝染色测定细胞活力。接着，在悬浮剂中清洗巨噬细胞，然后立即上样至LeviCell™。

测定巨噬细胞的初始活力为 81%（蓝条）。在LeviCell™中，活细胞悬浮高于死细胞，经分选后，其活力达到了98%！

这表明，LeviCell™不仅能够富集活细胞，而且对细胞作用温和，在分选过程中极少损伤细胞。

LeviCell™可保留巨噬细胞的极化状态

在证实LeviCell™能够分选活的巨噬细胞之后，我们验证了LeviCell™分选活的巨噬细胞且不会影响其活化状态的能力。

巨噬细胞可被极化为两种主要状态：M1 和 M2。M1巨噬细胞会促发炎症，以 iNOS和IL-12类细胞因子等酶的产生为表征。M2巨噬细胞会消除炎症，其表达中间体为Arg1等，并产生IL-10。

为获得M1和M2巨噬细胞，分别使用IFN-γ (50 ng/mL)和IL-4 (20 ng/mL)分别处理小鼠巨噬细胞系（在含有10% FBS的DMEM缓冲液中培养）24小时。并以未处理巨噬细胞(M0)作为对照。

在LeviCell™分选前巨噬细胞每种极性状态的初始细胞活力为~20%。经LeviCell™分选后，我们观察到细胞活力上升至88% – 100%。

进一步利用qRT-PCR检测M1 (iNOS) 和 M2 (Arg1) 状态的基因表达变化，以验证它们的活化状态未受到LeviCell™分选的影响。如下图结果所示，未观察到分选前后存在明显的iNOS（M1）和Arg1（M2）表达差异。这表明，LeviCell™分选对巨噬细胞足够温和，并未引起它们极化状态的改变，因而为相关研究提供了有力工具。

结论

针对如巨噬细胞等敏感细胞类型的各种分选方法和技术通常都需要专业知识丰富的研究人员花费数小时来完成操作流程。这涉及繁琐的手动工作流程，而手动操作又常常会引起产量低下、细胞受损且活力低的问题。LeviCell™的三步式操作无接触、无标记平台能够富集敏感或脆弱细胞类型，且不会引起其下游准确分析所必需的基因表达与原始样本表征发生变化。快速、简便、损失少、活力高、无碎片 - 20 分钟内即可完成所有操作。

LeviCell™助力巨噬细胞的研究

简介

方法