肿瘤分析

近年来，液体活检技术的开发与应用取得了显著进展，但其临床应用仍面临多种限制，待检样本的获取与制备就是其中关键一环，以肿瘤细胞样本为例：

• 细胞数量过少
  据报道，CTCs在血液中的含量极低（每百万至千万个血细胞中可能才有1个或以上的CTCs），且存在时间也很短暂（单个CTCs为~25-30分钟，CTC clusters为~6-10分钟） ^{9, 10}。其他体液中含有的脱落肿瘤细胞数量也同样相对稀少，让分离富集变得困难，使得下游检测结果多变 ¹¹。
• 低细胞活力
  现有的分离技术在分离回收脱落肿瘤细胞时，为提高捕获效率，可导致其捕获过程对细胞产生损伤，破坏细胞完整性，进而影响后续的培养及分析（如单细胞测序 ¹²等）应用。
• 细胞异质性
  脱落肿瘤细胞具有高度异质性，不同细胞类型其表达的生物标志物种类及丰度存在显著差异。且在疾病发展的过程中，标志物表达丰度也可能下调，甚至缺失，从而导致基于单一标志物的分离方法无法有效捕获所有脱落肿瘤细胞 ¹³。
• 分离富集技术的局限性
  基于免疫选择的分离技术依赖于标志物（如EpCAM等），而难以捕获非上皮来源或低丰度表达标志物的脱落肿瘤细胞；基于物理特性的分离技术则依赖于脱落肿瘤细胞与血细胞在尺寸、密度或介电特性等方面的差异，通常无法精确区分开脱落肿瘤细胞与某些正常血细胞。^{14, 15}
• 样本复杂性
  脱落肿瘤细胞分离富集需要处理大量的样本，而样本中的杂质（如血小板、白细胞、细胞碎片团等）会对分离过程产生干扰，进一步增加了分离的难度。